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用植物的组织培养来繁殖植物是植物学界革命

二.实验室设计与要求

(一)实验室设计与要求

(续12)另外可去废品公司寻找规格划一,数量较大的各种回收瓶子,其中有非常令人满意的代用瓶,有的还带有塑料或金属的旋盖。最好瓶口宽大,操作较方便,又可一层层叠起来,如0.51容量的水果罐头玻璃瓶也很实用。起初可买少量来试用,合乎要求再大量买回。要注意代用瓶是否耐冷热骤变,是否耐高压消毒,透明度如何,瓶盖是否耐高压灭菌,有无有毒物质溶出或以气体形态危害培养物等等,如不合用则立即淘汰。

从废品公司买回的瓶子,第一次洗涤要特别仔细,以免引人有害物质。回收的罐头瓶子价格低,由于需用量大,在投资并不充裕时,可选用。罐头瓶瓶壁都比三角烧瓶厚实,洗涤时损坏率较小。因壁厚,在高压灭菌时应适当延长灭菌时间。通常为避免培养基中成分损失,多延长不加压的煮沸时间,使充分预热升温,而加压的时间仍按常规较好。在使用儿乎全密闭的瓶盖,如聚丙烯或尼龙盖、铁盖,绑扎的聚丙烯薄膜盖时,往往按正常的灭菌操作不能彻底灭菌,培养基会自动大量污染,造成工作中的严重损失。这是因为高压的热蒸汽不能自由地进入瓶内空间,瓶内的冷空气不能迅速被热蒸汽取代,升温缓慢,在限定的15一-20分钟内难以升到C的温度,或升到C但没有保持到15--20分钟,因而不能彻底灭菌。

如果密闭得紧,那么瓶内空间不可能获得如灭锅的蒸汽压力表上所指示的压力和温度,当然难以杀灭造成污染的微生物了。解决这一问题的办法很简单,即在灭菌前不要把盖完全拧紧,在绑扎薄膜盖前衬垫一小块纱布,以使瓶内外冷热空气和压力得以交流和平衡。在灭菌后及时旋紧瓶盖,而在接种后拿掉衬垫的小纱布(可以反复使用)。有报告指出,钠玻璃瓶对某些植物组织有毒性,尤其是在多次高压灭菌后使用时。因此,在做研究工作时要采用硼硅酸盐玻璃瓶或硬质玻璃瓶。目前国外已遂渐改用耐高温的聚丙烯塑料容器,通常使用一次即弃去(即所谓takeawaycontainer),节省洗涤人工,提高效率。我国对用于组织培养的塑料制品已引起有部门的重视,新产品即将陆续面市。塑料容器一般都有十分理想的使用效果,质轻,透明,不易破碎,多为平底长方盒形,不但培养的植株数多,而且能一层层地叠加起来,节约空间。

容器的数量取决于生产规模,主要是无菌操作工人人数、每天工作数量和所生产的植物需要培养的天数,即培养周期。例如花叶芋的培养周期为30--40天,这段时间约有26--34个工作日,每天1人接种,定额瓶,那么培养架上经常存架瓶数约-瓶,再加上处于洗涤、备用培养基环节中的瓶数,并计入损耗、贮备等,应有个瓶子。但是一个生产单位很少只生产1种植物,完全靠计算就复杂而又无必要,通常经1-2个月试用后,瓶数就基本上稳定在一个水平上了。




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